KLOROFİL TAYİNİ

Çalışma Yöntemi

  1. Numuneler en kısa sürede filtre edilir.
  2. İşlem gecikecek ise, ışık etkisinden korumak için buz üzerinde veya 40C’da saklanır. Bekletme sırasında ışığın klorofil değerlerinin değişmesine neden olmaması için opak şişeler kullanılır.
    NOT:
     pH’ı 7 veya daha yüksek filtre sularında alınan numuneler 3 hafta süreyle hava geçirmez kaplara yerleştirilerek dondurucuda saklanır.
    Asidik sulardan alınan numunelerde klorofil parçalanmasını önlemek için derhal çalışılmalıdır. Kullanılan cam kaplar ve küvetlerde temiz ve asitsiz olmalıdır. 
  3. Süzmede kullanılan filtre “tissue grinder” içine (Glass-Fiber filtreler için TFE/Glass Grinder kullanılır) konur.
  4. 10 mL %90’lık aseton çözeltisi alınır.
  5. Alınan aseton çözeltisinin 2–3 mL’si ile tissue grinder içindeki filtre kâğıdı üzerine konur.
  6. Tissue grinder içinde filtre kâğıdı çözücü ile temas halinde iken parçalanır.
  7. Tissue Grinder içindeki örnek birkaç mililitre aseton çözeltisi de kullanılarak vida kapaklı santrifüj tüpüne transfer edilir.
  8. Kalan aseton çözeltisi ile öğütücü yıkanır ve yıkama ekstraksiyon bulamacına ilave edilir.
  9. 1 Dakika süreyle 500 devir/dakika dönme hızında yumuşatılarak eritilir.
  10. Karanlıkta 40C’da en az iki saat süreyle örnekler bekletilerek, ekstraksiyonun tamamlanması beklenir.
  11. Kapaklı tüp de 500 devir/dakika hızla, 20 dakika süre ile santrifüj edilir.
  12. Spektrofotometrede yapılacak ölçümler için berraklaşan üst kısımdan alınan 3-5 mL kullanılır.
  13. Numune küvetine konulan 3 mL’nin (1 cm’lik küvete) 750, 664, 647 ve 630 nm’de absorbansları okunur.
    NOT:
    750 nm’deki absorbans okuması bulanıklık düzeltmesi içindir. 664, 647 ve 630 nm’deki absorbans okumalarından 750 nm’deki absorbans okuması çıkarılarak değerler düzeltilir ve hesaplamalarda bu düzeltilmiş değerler kullanılır.
  14. Küvete 0.1 mL 0.1 N HCl ilave edilir.
  15. Dikkatlice karıştırılır ve 90 saniye kadar beklenir.
  16. 750 ve 665 nm’lerde absorbans okumaları yapılır.
    NOT:
    750 nm’deki absorbans okuması bulanıklık düzeltmesi içindir. 665 nm’deki absorbans okumasından 750 nm’deki absorbans okuması çıkarılarak değer düzeltilir ve hesaplamalarda bu düzeltilmiş değer kullanılır.